无菌操作原则、注意事项，及无菌技术操作流程

无菌操作，是指在无菌室或超净台中进行以防止微生物进入人体或污染供试菌的操作技术。无菌操作是各种生物实验和生产实践中一项重要的基本操作。无菌操作的要求是：操作前将操作空间中的细菌和病毒等微生物杀灭；操作过程中保证操作空间与外界隔离，避免微生物的侵入。本篇贤集网小编来为大家介绍一下无菌操作原则、无菌操作注意事项，及无菌技术操作流程，一起来看看吧。

无菌操作简介

用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。如外科手术需防止细菌进入伤口．在各种生物实验中，为了防止微生物地生长和繁殖影响实验的进行，也要在无菌的环境下进行。

要求

1、操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭。

2、操作过程中是界面与外界隔离，避免微生物的侵入。

无菌操作原则：

1、环境要清洁，进行无菌操作前半小时，须停止清扫地面等工作。避免不必要的人群流动，防止尘埃飞扬。治疗室应每天用紫外线消毒一次。

2、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。

3、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。

4、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。

5、无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。

6、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期，其中用物是否适量。

7、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免取用时碰在容器外面被污染。

无菌操作注意事项

1、玻璃器皿的消毒和清洁

⑴新购玻璃器皿的处理

新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷，流水冲洗，再用1%～2%盐酸溶液浸泡，以除去游离碱，再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等，经清水洗净后应注入浓盐酸少许，慢慢转动，使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸，再用水冲洗。

⑵污染玻璃器皿的处理

①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡，再煮沸30分钟，或在3%～5%漂白粉澄清液内4小时，有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫，然后用清水冲洗至无肥皂为止。最后用少量蒸馏水冲洗。

②细菌培养用的试管和培养皿可先行集中，用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟，再用热水洗涤后，用肥皂洗刷，流水冲洗。

③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时，逐支用流水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗。

④油蜡沾污的器皿，应单独灭菌洗涤，先将沾有油污的物质弃去，倒置于吸水纸上，100℃烘干半小时，再用碱水煮沸，肥皂洗涤，流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。

⑤染料沾污的器皿，可先用水冲洗，后用清洁或稀盐酸洗脱染料，再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性，所以不宜用肥皂的碱水洗涤。

⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水冲洗，再用肥皂或弱碱性煮沸，自然冷却后，流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片，可置于清洁液内浸泡后再冲洗。

2、无菌器材和液体的准备

将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于120℃的干燥箱中干燥灭菌2小时，取出备用。对于手术器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，则采用高压蒸气灭菌法，即在15磅的条件下，加热20分钟。而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后使用。

3、无菌操作过程在无菌操作过程中，最重要的是要保持工作区的无菌、清洁。因此，在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的止血钳、镊子等。培养瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，戴上胶皮乳头，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。

4、常用清洁液的配制法

⑴重铬酸钾清洁液：可根据不同需要，选用下列的任何一种浓度。先将重铬酸钾溶于水中，再慢慢加入浓硫酸。注意，此时可产生高热，应防止容器破裂。重铬酸钾清洁液除污力强，腐蚀性大，应避免接触皮肤和衣服。为防止吸收空气的水分而变质，此液应贮存于带盖的容器中。如清洁效力较差，可再加入少量重铬酸钾及浓硫酸，还可继续使用。直到液体变蓝绿色，即不能再用。配制重铬酸钾清洁液时，宜用耐高温的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用玻璃器皿时，应特别注意防止产生高热而破裂，切忌用量筒来配制。

⑵磷酸三钠将其配成5%～10%水溶液，可用于洗涤玻璃器皿上的油污，但经常使用腐蚀玻璃，使器皿表面模糊、毛糙。

⑶硝酸清洁液将其配成50%水溶液，可用于清洁微量滴定筒。⑷乙二胺四乙酸二钠（EDTA钠盐）将其配成5%～10%水溶液，可洗脱粘附于玻璃器皿内壁的白色沉淀物。⑸尿素溶液尿素是溶解蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤粘附有血液血清等蛋白质的吸管、试管等。

无菌技术操作流程

操作前准备

着装整齐，修剪指甲，取下手表，戴口罩、洗手

评估环境

1、治疗室环境清洁、明亮，符合无菌技术操作要求；操作台宽敞、清洁、干燥

2、用物准备无菌持物钳包、无菌巾包、无菌储槽（储槽内为无菌换药碗）、无菌溶液、注射器、输液贴、无菌手套、棉签、安尔碘、清洁治疗盘、污物碗、笔、标签纸。

3、逐一检查物品。

无菌持物钳：检查无菌持物钳包外包装无破损、潮湿、松动，3M胶带是否变色均匀黑染，在有效期；

无菌巾包：有外包装无破损、潮湿、松动，3M胶带是否变色均匀黑染，在有效期；

无菌容器：检查无菌容器3M胶带变色均匀黑染，在有效期内，储槽侧孔、底孔已关闭

无菌溶液：遵医嘱准备无菌溶液，检查药品名称、剂量、浓度、有效期；标签无破损；瓶口瓶底瓶体无裂痕；对光检查溶液无浑浊、沉淀、絮状物

操作过程

一、无菌持物钳的使用

1、打开无菌持物钳包，检查1250指示卡变色均匀黑染（消毒有效），取出持物钳筒（罐）及持物钳置于治疗台面上，标明起止日期和时间。有效期4小时；

2、取无菌持物钳时，钳端闭合向下，不可碰及容器边缘及液面以上，用后立即放回容器内。

二、取无菌巾

1、取一治疗盘（质料盘清洁、干燥）置于治疗台适当位置；

2、逐层打开无菌巾包，用无菌持物钳夹取无菌巾1块，放入治疗盘中；

3、将无菌巾轻轻抖开，双折铺于方盘内，双手捏住无菌巾上层两角的外面，远端呈扇形折叠，开口边向外（注意不要跨越无菌区）。

三、无菌容器使用法

1、打开无菌储槽，注意手不要跨越无菌区；用无菌持物钳取出一个无菌碗，放入治疗盘的治疗巾内；

2、用毕将容器盖严，记录起止时间和日期，打开后有效期为24小时；

3、取无菌溶液，揭开瓶盖，手握标签面倒少许溶液冲洗瓶口，再由原处倒出所需液量于无菌容器内，套上瓶塞，表明起止日期、时间；

4、打开无菌巾包，用无菌持物钳先将治疗碗移至无菌盘中央。盖上治疗巾，下缘向上折两次，左右两侧向下折叠，注意不要跨越无菌区。无菌治疗盘注明名称、起止日期、时间；有效期24小时；

5、消毒瓶塞，盖严，注明开瓶日期、时间。

四、戴无菌手套

洗手、擦干。检查手套外包装是否完好、无潮湿、破损，检查手套型号、有效期

1、持手套反折部分向前向上取出手套，拇指相对，一手伸入手套内戴好，未戴手套的手不可触及手套外面；

2、，已戴好手套之手伸入另一手套之反折部分辅助另一个手戴好；

3、已戴手套的手，不能接触未戴手套的手臂和非无菌物；

4、戴好手套的双手合扰，举在胸前无菌区域范围内。操作完毕后，摘手套，注意无菌；

5、洗手。

注意事项：

1、无菌包外包装不完整、过期或潮湿者应及时更换，溶液有混浊或絮状物者应废弃。

2、使用无菌持物钳时不能低于腰部。打开包后的干镊子罐、持物钳应当4小时更换。

3、使用无菌容器时，不可污染盖的内面、容器边缘及内面。有效期24小时。

4、不可以将无菌物品或者非无菌物品伸入无菌溶液内蘸取或者直接接触瓶口倒液。已倒出的溶液不能再倒回瓶内。壹打开的溶液有效使用时间为24小时。

5、无菌盘的有效期为4小时。