微生物多样性检测的土壤样本的采集和保存方法

对于习惯了大生态的朋友们，第一次做土壤微生物多样性检测，可能存在许多疑惑。比如样本该怎么采集？需要多少量？怎么保存？检测完成后可以拿到什么结果？

采样是实验的第一步，正确的样本采集和保存方法是保证实验顺利进行的关键。

鉴于此，给大家介绍下做微生物多样性检测的土壤样本的采集和保存方法。针对常见土壤/沉积物的类型，对其采样和保存方法进行分别介绍。

采样工具和耗材

在采样前需准备好全部的采样工具和耗材，尤其是在野外采样，宁可多带，也不要少带。

常见的采样工具和耗材主要有以下几种。

铁锹、土钻、铝盒、环刀、小刀、剪刀、小铲子、GPS（用于采集采样点的经纬度）、牛皮纸、布袋、刷子、中性笔、记录表、记录板、直尺（建议采用钢尺，塑料材质的容易折断）、记号笔（建议用油性的，水性的很容易被擦掉）、无菌管（建议用第二种螺口管，最好不要用第一种，如果没有盖紧，第一种管口很容易开，如果在运输过程中管口开了，样本可能就会污染）等。

运输和保存耗材

泡沫盒、保温瓶、冰袋、干冰等

普通土壤样本的采集

由于土壤本身具有异质性特性，在野外采样时，可采用多点采样（一般为5个），再混为一个样的方法。在采样时一般都是随机采集，可以采用梅花点法、棋盘式法和蛇形法等。

根据实验目的，采集不同深度的土壤，一般表层土取0-5cm或0-10cm，可以用铁铲和小铲子配合完成；如果土壤样本较深，可以采用土钻和小铲子进行采集。

做微生物多样性检测如细菌、真菌、古菌等，一个样本可以采集1g新鲜土壤，将新鲜土壤放入无菌管中储存。

一个处理组建议至少要3个样本，如果经费充足的话，建议一个处理组选择5个及以上的样本。

为了维持样本中微生物的群落结构，土壤样本需低温保存和运输。盛有新鲜土壤样本的无菌管可以放入冰盒（泡沫盒+冰袋/干冰）或保温瓶（保温瓶+冰袋/干冰）中进行保存，到实验室后尽快放入-20或-80冰箱。

根际土的采集

根际土一般是指附着在根系表面的土壤。

在采集根际土时首先要采集包含植物根系的土壤，对于质地松散的土壤，采用抖土法抖掉与根系松散结合的土壤，采用小刷将与根系紧密结合的土壤刷下来，作为根际土。

对于质地比较粘稠的土壤，可以先甩掉附着在根系上的大多数黏土，之后利用剪刀将带土的根系剪下来，放入盛有无菌PBS的无菌管里，通过振荡将附着的根际土振荡下来，作为检测根际微生物的样本。

一般一个样本采集1g新鲜土壤，放入无菌管进行储存，在野外放入冰盒或保温瓶里，到实验室后尽快放入-20或-80冰箱进行保存。

淤泥/沉积物的采集

与普通土壤相比，淤泥/沉积物通常含水会比较高，采样方法也跟普通土壤采集方法有所不同。

如果采集河滩、海滩等样本，可以利用小铲子完成；如果采集河底、海底等特殊地段的样本，通常采用专业的采样设备如采泥器来完成样本采集。

每个样本一般也采集1g，建议放入无菌管进行储存，尽快放入冰盒或盛有冰袋或干冰的保温瓶里进行低温保存，到实验室后放入-20或-80冰箱。

一组至少要设置3个样本，如果经费充足，建议设置5个及以上的样本。

“工欲善其事，必先利其器”，正确的样本采集和保存方法，是整个实验项目成败的关键。